Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui sejauh mana analisis isi Twitter @KAI121 sebagai media alternatif humas PT Kereta Api Indonesia (Persero) dalam membangun hubungan dengan publik periode 23 Desember 2015-5 Januari 2016.
Penelitian ini menggunakan pendekatan kuantitatif dengan metode analisis isi (content analysis) yang bersifat deskriptif. Teknik pengumpulan data menggunakan data primer, yaitu tweet-tweet @KAI121 periode 23 Desember 2015-5 Januari 2016 dan data sekunder, yaitu penelitian kepustakaan serta online research. Untuk teknik analisis data menggunakan tabel frekuensi, menghitung dengan rumus Holsti.
Hasil Penelitian: Pada kategorisasi bentuk pesan, terdapat dimensi tweet informatif sebanyak 132 tweet (88%.), dimensi tweet persuasif sebanyak 17 tweet (11.33%), dan dimensi tweet koersif sebanyak 1 tweet (0.67%). Pada kategorisasi tone/arah opini publik, terdapat dimensi tone netral sebanyak 93 tweet (62%), dimensi tone positif sebanyak 52 tweet (34.67%), dan dimensi tone negatif sebanyak 5 tweet (3.33%). Pada kategorisasi jenis narasumber/publik PR, terdapat dimensi corporate sebanyak 87 tweet (58%), dimensi individu sebanyak 31 tweet (20.67%), dimensi news portal sebanyak 21 tweet (14%), dan dimensi komunitas sebanyak 11 tweet (7.33%). Dapat disimpulkan bahwa untuk mengukur hubungan organisasi-publik antara PT Kereta Api Indonesia (Persero) dengan publiknya, dalam hal ini folloiwers @KAI121, kategorisasi tweet berdasarkan bentuk pesan informatif merupakan kategorisasi tweet yang memiliki jumlah paling tinggi dalam penelitian ini. Selain itu, hasil pengukuran hubungan organisasi-publik antara PT Kereta Api Indonesia (Persero) dengan followers @KAI121 dilihat dari tone/arah opini publik yang muncul pada Twitter @KAI121 periode 23 Desember 2015 hingga 5 Januari 2016 paling banyak adalah tone yang bersifat netral, yaitu sebanyak 93 tweet. Lalu, hasil penelitian untuk menjawab sejauh mana penggunaan narasumber pada Twitter PT Kereta Api Indonesia (Persero), yaitu pada akun @KAI121 adalah narasumber atau pengguna Twitter yang membicarakan PT Kereta Api Indonesia (Persero) yang paling banyak adalah publik yang bersifat corporate atau perusahaan dengan jumlah persentase sebesar 58%.

Kata Kunci : Twitter, Media Humas, Hubungan Organisasi-Publik, Kategorisasi tweet (Bentuk Pesan, Tone/Arah Opini Publik, Jenis Narasumber/Publik PR)
Jumlah Literatur : 34 Buku (2000-2014), 59 Website